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糞便隱血試驗(yàn)-檢驗(yàn)基礎(chǔ)

發(fā)表時(shí)間:2013/11/29 15:20:08 來源:中大網(wǎng)校 點(diǎn)擊關(guān)注微信:關(guān)注中大網(wǎng)校微信
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糞便隱血試驗(yàn)是檢驗(yàn)技師需要了解的知識(shí),醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜索整理如下:

當(dāng)上消化道少量出血,紅細(xì)胞被破壞,肉眼不見血色,鏡檢不能看到紅細(xì)胞,稱為隱血。檢測(cè)隱血的試驗(yàn)方法稱為隱血試驗(yàn)。

一、方法

(一)鄰-甲苯胺法[原理]血紅蛋白中的亞鐵血紅素有類似過氧化物酶活性,能催化過氧化氫放出新生態(tài)的氧,將鄰-甲苯胺氧化為鄰-甲偶氮苯,呈現(xiàn)藍(lán)色。

【試劑】

1.鄰-甲苯胺冰乙酸溶液:取AR級(jí)鄰-甲苯臘150ml,加冰乙酸至lOOOml.可借用血糖鄰-甲苯胺試劑。

2.1mol/L過氧化氫溶液。

[操作]用竹簽挑取少許糞便于白瓷板、玻片或?yàn)V紙上,滴加鄰-甲苯胺冰乙酸溶液2-3滴,再加過氧化氫溶液2-3滴,混勻后立即觀察結(jié)果。也可用棉簽涂取少許糞便,然后將鄰-甲苯胺冰乙酸溶液和過氧化氫溶液直接滴加在棉簽上,立即觀察結(jié)果。

【結(jié)果判斷】

++++:加入試劑后立即出現(xiàn)黑藍(lán)色。

+++:加入試劑后立即出現(xiàn)藍(lán)褐色。

++:加入試劑后初顯淺藍(lán)色,逐漸呈明顯藍(lán)褐色。

+:加入試劑lOs后,初顯淺藍(lán)色漸變?yōu)樗{(lán)色。

-:加入試劑2分鐘后仍不變色。

【注意事項(xiàng)】

1.過氧化氫易分解失效,要經(jīng)常檢查。方法是將其滴加在血膜上,若逐漸產(chǎn)生較多小氣泡表示有效,否則要重新配制。

2.試驗(yàn)前3天禁食動(dòng)物血、肉、肝及鐵劑、中藥或生食富含葉綠素食物等,以免引起假陽性;糞便膿汁中的中性粒細(xì)胞內(nèi)過氧化物酶也可引起假陽性,可將標(biāo)本用生理鹽水制成糊狀煮沸2分鐘,冷卻后再進(jìn)行試驗(yàn)。

3.維生素C等還原性物質(zhì)可干擾過氧化氫對(duì)顯色物的氧化,引起假陰性。

4.用正常糞便或在其中加入少量溶血液制備陰性或陽性質(zhì)控標(biāo)本,每天與待檢標(biāo)本平行測(cè)定進(jìn)行質(zhì)控。試驗(yàn)用具應(yīng)加熱去除污染的過氧化物酶,避免對(duì)試驗(yàn)的影響。

(二)免疫膠體金試紙法

【原理】

在特制的纖維試紙條上預(yù)包被金標(biāo)記抗人血紅蛋白抗體(Au-Ab1),在檢測(cè)線和控制線上分別固定抗人血紅蛋白抗體(Ab2)和針對(duì)金標(biāo)記抗人血虹蛋白抗體的第二抗體(Ab3)。檢測(cè)時(shí),若存在人血紅蛋白(Hb),由于滲透作用,將在檢測(cè)線處形成“Ab2-Hb——Ab1-Au”夾心結(jié)構(gòu),同時(shí)在控制線處形成“Ai—Ab1-Au”,出現(xiàn)兩條色帶,呈陽性反應(yīng);若不存在Hb,則僅在控制線處出現(xiàn)一條色帶。

【操作】 1.取一潔凈干燥載玻片,滴加蒸餾水1-2滴。

2.用竹簽挑取少許糞便,均勻涂抹于蒸餾水中,使成混合液,并讓混合液集中。

3.將糞便隱血檢測(cè)試帶的反應(yīng)端浸入混合液中,5分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。

【結(jié)果判斷】

陽性:控制線和反應(yīng)線均顯示色帶(即出現(xiàn)兩條色帶)。陰性:僅在控制線出現(xiàn)一條色帶。

無效:不出現(xiàn)色帶或控制線不出現(xiàn)色帶為無效,應(yīng)重做試驗(yàn)。

【注意事項(xiàng)】

1.試帶應(yīng)低溫保存,不能冰凍,用前先復(fù)溫。

2.糞便必須多部位多層面采集,尤其對(duì)硬質(zhì)糞便。

3.用蒸餾水涂片。試帶浸入時(shí)不要超過標(biāo)記線。

4.若糞便外觀呈柏油樣而試驗(yàn)為陰性時(shí),可能是由于血紅蛋白過多,出現(xiàn)抗原過剩(前帶現(xiàn)象),此時(shí)應(yīng)將糞便混合液稀釋后再進(jìn)行檢測(cè)。

(三)方法學(xué)評(píng)價(jià)

1.化學(xué)法是糞便隱血試驗(yàn)的傳統(tǒng)方法,按其試劑的組成成分及操作方法分為普通化學(xué)法和化學(xué)試帶法(將化學(xué)試劑組成成分置于試紙條上)。其原理基本相同,都是血紅蛋白中的亞鐵血紅素具有類似過氧化物酶的作用,催化過氧化物產(chǎn)生新生態(tài)的氧,氧化色原顯色,如鄰。甲苯膠法、鄰聯(lián)甲苯膠法、匹拉米洞法、無色孔雀綠法等。這些方法簡(jiǎn)單易行,靈敏度也能滿足臨床要求,但缺乏特異性和準(zhǔn)確性,此外化學(xué)試劑不穩(wěn)定,久置后可使反應(yīng)減弱。外源性血紅蛋白、肌紅蛋白、植物性過氧化物酶等均可引起假陽性,食入維生素C或其他具有還原作用的藥物可引起假陰性,因此,要求素食3天后,再收集標(biāo)本進(jìn)行試驗(yàn)。

2.免疫學(xué)方法是糞便隱血試驗(yàn)發(fā)展普及最快的方法。通常采用單克隆或多克隆抗體,針對(duì)糞便中的人血紅蛋白或人紅細(xì)胞基質(zhì),用免疫學(xué)方法檢測(cè)糞便中的隱血,如免疫單擴(kuò)法、酶聯(lián)免疫吸附法、免疫斑點(diǎn)法、免疫肢體金夾心法等。免疫學(xué)方法操作簡(jiǎn)便、快速,特異性好,靈敏度高,因而不需選擇飲食。免疫學(xué)糞便隱血試驗(yàn)方法被認(rèn)為是目前對(duì)大腸癌普查最適用的方法。該類方法主要檢測(cè)下消化道出血,上消化道出血有近50%不能檢出,原因是血紅蛋白被消化酶降解變性或消化而失去抗原性、患者的血紅蛋白抗原與抗體不匹配或者過量出血而使抗原過剩等。因靈敏度很高,某些正常人尤其是服用胃腸剌激藥物時(shí)也可出現(xiàn)陽性反應(yīng)。

3.糞便隱血試驗(yàn)無論用什么方法,均要求多部位多層面采集糞便標(biāo)本,多次試驗(yàn),以保證檢出率,并區(qū)分出血是間斷性還是持續(xù)性。

二、臨床意義

1.糞便隱血試驗(yàn)對(duì)慢性消化道出血的診斷有重要價(jià)值,該試驗(yàn)陽性說明消化道有出血,如消化道潰瘍、消化道腫瘤、結(jié)腸息肉、鉤蟲病或藥物性胃粘膜損傷等都可出現(xiàn)陽性。

2.糞便隱血試驗(yàn)可鑒別消化道出血病變的性質(zhì),如消化道腫瘤時(shí)呈持續(xù)陽性,而消化道潰瘍出血多為間斷陽性。

3.糞便隱血試驗(yàn)常作為消化道惡性腫瘤診斷的一個(gè)篩選指標(biāo),尤其對(duì)中老年人早期發(fā)現(xiàn)消化道惡性腫瘤有重要價(jià)值。

(責(zé)任編輯:liushengbao)

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